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细胞生长和凋亡
一:MTT法广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗官网药物筛选、细胞毒性试验以及官网放射敏感性测定等。
MTT主要应用于

① 细胞增殖程度的测定;
② 细胞活性的测定;
③ 药物或其他因素对培养细胞的毒性测定;
MTT服务流程
① 收集对数生长期细胞并计数;
② 接种细胞;配成单细胞悬液,接种于96孔板,接种密度为每孔103-104
③ 培养细胞:5%CO2,37℃孵育,培养1天~5天(需根据试验目的和要求决定培养时间);
④ 加入MTT溶液,继续孵育4 h~6h;
⑤ 终止培养,去除培养上清液;
⑥ 加入DMSO,脱色摇床振荡10min,使结晶物充分融解;
⑦ 酶联免疫监测仪选择490nm或570nm波长,测定各孔光吸收值;
⑧ 记录结果,绘制细胞生长曲线。
实验周期
① 1-10个样本,7个工作日
② 10-100个样本,10个工作日
③ 100个样本以上,20个工作日
提供结果
完整的实验操作步骤、吸光度值、细胞生长曲线图、MTT统计分析图等结果。

二:FCM检测细胞周期技术服务

MTT法难以客观反映细胞毒活性。近年来,随着流式细胞术的不断发展和普及,建立了以荧光素标记靶细胞并结合细胞毒相关酶染料检测细胞毒活性的流式细胞术体内和体外分析方法。
1、 FCM检测细胞周期服务流程
① 培养细胞,分为阴性对照组与细胞凋亡诱导组等实验组;
② PBS清洗细胞2~3次,调整细胞密度为1×106个/ml;
③ 将细胞悬液100ul转移至试管中;
④ 加入FITC标记的annexin V和PI溶液,轻轻混匀;
⑤ 室温避光放置10~15min;
⑥ 加入400ul 1×结合缓冲液,将全部液体转移至FACS分析用试管;
⑦ 尽快进行FACS分析。
注:以上流程是以PS外翻法为例,根据FCM检测细胞凋亡方法不同,操作步骤有所区别。
实验周期
① 1-10个样本,7个工作日
② 10-50个样本,20个工作日
③ 50个样本以上,30个工作日
提供结果
完整的实验操作步骤、FCM细胞周期分布、实验数据等结果。

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